成人区人妻精品一区二区不卡网站,欧美大荫蒂av高潮,久久中文字幕无码A片不卡古代,欧美熟妇另类久久久久久多毛

18101056239
ARTICLES

技術(shù)文章

當(dāng)前位置:首頁技術(shù)文章cck8實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)

cck8實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2025-09-01點(diǎn)擊次數(shù):43

Cell Counting Kit-8 簡稱CCK-8 試劑盒,為MTT法的替代方法,是一種基于WST(水溶性四唑鹽,化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒??捎糜谒幬锖Y選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗(yàn)。下面介紹一下索萊寶cck8實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)。

一. 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(測定細(xì)胞具體數(shù)量)

1、先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量,然后接種細(xì)胞到培養(yǎng)板內(nèi)。

2、按比例(例如:1/2比例)依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度,一般要做3-5個(gè)細(xì)胞濃度梯度,每個(gè)濃度建議3-6個(gè)復(fù)孔。

3、接種后培養(yǎng)2-4小時(shí)使細(xì)胞貼壁,然后加CCK試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測定OD值,制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)(X軸),OD值為縱坐標(biāo)(Y軸)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量(使用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實(shí)驗(yàn)的條件要一致,便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK后的培養(yǎng)時(shí)間。)

二. 細(xì)胞活性檢測

1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液(100μL/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)一段時(shí)間(37℃,5% CO2)。

2、向每孔加入10 μL CCK溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數(shù))。

3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。

4、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。

5、若暫時(shí)不測定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測定,吸光度不會發(fā)生變化。

三. 細(xì)胞增殖-毒性檢測

1、在96孔板中配置100μL的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)(37℃,5% CO2)。

2、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測物質(zhì)。

3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間(例如:6、12、24或48小時(shí))。

4、向每孔加入10μL CCK溶液(注意不要再孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數(shù))。

5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。

6、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。

7、若暫時(shí)不測定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測定,吸光度不會發(fā)生變化。

注意:如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話,可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基(除去培養(yǎng)基,并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的培養(yǎng)基),去掉藥物影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況下,可以不更換培養(yǎng)基,直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。

Note:

1)建議先做幾個(gè)孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。

2)有條件的情況下建議采用多通道移液器,可以減少平行孔間的差異。加入CCK試劑時(shí),建議斜貼著培養(yǎng)板壁加,不要插到培養(yǎng)基頁面下加,容易產(chǎn)生氣泡,會干擾OD值讀數(shù)。

3)白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長時(shí)間。

4)當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí),貼壁細(xì)胞的最小接種量至少為1,000 個(gè)/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。檢測白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對較低,因此推薦接種量不低于2,500 個(gè)/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實(shí)驗(yàn),請先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量,并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK溶液。

5)如果沒有450nm的濾光片,可以使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片,但是450nm濾光片的檢測靈敏度最高。

6)培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計(jì)算時(shí),通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不會對檢測造成影響。


掃碼加微信,了解最新動態(tài)

掃碼加微信
010-50973130

Copyright © 2025 北京索萊寶科技有限公司版權(quán)所有

技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)    sitemap.xml

欧美黑人又大又粗xxxxx| 男男车车的车车网站w98免费| 国产亚洲精品拍拍拍拍拍| 国产精品无码无卡无需播放器| 欧美日韩在线视频| 亚洲av无码一区二区三区乱子伦 | 最近韩国日本免费观看免费| 久久ER热在这里只有精品66| 久久久久亚洲av无码专区电影| 欧美疯狂做受XXXXX高潮| 欧美性生交XXXXX无码小说| 精品无人区一线二线三线区别| 成人欧美尽粗二区三区AV| 欧美人伦禁忌DVD放荡欲情| 成人亚洲区无码偷拍12p | 国产AV精品一区二区三区视频| 久久精品无码av一区二区三区| 日韩人妻无码一区二区三区免费| 亚洲成AV人片在线观看无| 日本少妇人妻xxxxx18| H高潮娇喘抽搐A片国产麻豆| 激情人妻另类人妻伦| 精品久久久无码中文字幕边打电话| 国产99视频精品免视看9| 精品熟女60老妇av免| 国产精品第一区揄拍无码| 国产睡熟迷奷系列精品| 97夜夜澡人人双人人人喊| 人妻少妇av中文字幕乱码| 久久久久久精品天堂无码中文字幕| 欧美大浪妇猛交饥渴大叫| WWW色情成人免费视频软件| 国产亚洲精品精品精品| 欧美巨大乳bbwvideos| 色AV色婷婷66人妻久久久| 18禁美女黄网站色大片免费观看| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 欧美精品亚洲精品日韩专区| 国产精品久久久久久亚洲按摩蜜桃 | 乱码丰满人妻一二三区麻豆 | 久久国产加勒比精品无码|