說(shuō)明：蛋白質(zhì)合成抑制劑。抑制細(xì)菌、藻類原生物和哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)。

嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑鏈霉菌（Streptomyces alboniger）發(fā)酵代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素，通過(guò)抑制蛋白質(zhì)合成而殺死革蘭氏陽(yáng)性菌，各種動(dòng)物和昆蟲(chóng)細(xì)胞。某種特殊情況下有效作用大腸桿菌。作用機(jī)制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的類似物，能夠與核糖體的A位點(diǎn)結(jié)合并摻入到延伸的肽鏈中。嘌呤霉素同A位點(diǎn)結(jié)合后，不會(huì)參與隨后的任何反應(yīng)，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成的提前終止并釋放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。

嘌呤霉素產(chǎn)生菌Streptomyces alboniger內(nèi)發(fā)現(xiàn)的pac基因編碼嘌呤霉素N-乙酰轉(zhuǎn)移酶（PAC），賦予機(jī)體對(duì)嘌呤霉素產(chǎn)生抗性。這一特性如今普遍應(yīng)用于篩選特定攜帶pac基因質(zhì)粒的哺乳動(dòng)物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。

嘌呤霉素在細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選中的普遍應(yīng)用與慢病毒載體的特性有關(guān)，現(xiàn)在商業(yè)化的慢病毒載體多數(shù)都攜帶pac基因。在某些特定情況下，嘌呤霉素亦可以用來(lái)篩選轉(zhuǎn)化攜帶pac基因質(zhì)粒的大腸桿菌菌株。

使用方法

1.建議使用濃度

哺乳動(dòng)物細(xì)胞：1-10 μg/mL，最佳濃度需要?dú)缜€來(lái)確定；

大腸桿菌：LB瓊脂培養(yǎng)基篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)化pac基因的大腸桿菌，使用濃度為125μg/mL。注：使用嘌呤霉素篩選大腸桿菌穩(wěn)轉(zhuǎn)株需要精確的pH值調(diào)節(jié)，而且受宿主細(xì)胞本身的影響。

2. 嘌呤霉素殺滅曲線的確定（以shRNA轉(zhuǎn)染或者慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)為例）

嘌呤霉素有效篩選濃度跟細(xì)胞類型、生長(zhǎng)狀態(tài)、細(xì)胞密度、細(xì)胞代謝情況及細(xì)胞所處細(xì)胞周期位置等有關(guān)。為了篩選到穩(wěn)定表達(dá)的shRNA細(xì)胞株，確定殺死未轉(zhuǎn)染/轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的最低濃度嘌呤霉素至關(guān)重要。建議初次做實(shí)驗(yàn)的客戶一定要建立適合自身實(shí)驗(yàn)體系的殺死曲線（kill curve）。

1） Day 1：24孔板內(nèi)以5~8 x 104 cells/孔的密度鋪板，鋪?zhàn)銐蛄康目滓赃M(jìn)行后續(xù)的梯度實(shí)驗(yàn)。37℃細(xì)胞孵育過(guò)夜；

2） Day 2：a）準(zhǔn)備篩選培養(yǎng)基：含不同濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基（如0-15μg/mL，至少5個(gè)梯度）；b）往孵育過(guò)夜后的細(xì)胞內(nèi)更換新鮮配制的篩選培養(yǎng)基；之后37℃孵育細(xì)胞；

3） Day 4：更換新鮮的篩選培養(yǎng)基，并觀察細(xì)胞存活率。

4） 根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，約2-3天更換新鮮的篩選培養(yǎng)基；

5） 每日監(jiān)測(cè)細(xì)胞，觀察存活細(xì)胞率，從而確定抗生素篩選開(kāi)始4-6天內(nèi)有效殺死非轉(zhuǎn)染或者所有非轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的藥物最低濃度。

3. 哺乳動(dòng)物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的篩選

等轉(zhuǎn)染含有pac基因的質(zhì)粒后，細(xì)胞在含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基中增殖，以篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染子。

1）細(xì)胞轉(zhuǎn)染48h后，將細(xì)胞（原樣或稀釋）置于含有適當(dāng)濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

注意：當(dāng)細(xì)胞處于分裂活躍期時(shí)，抗生素作用最明顯。細(xì)胞過(guò)于密集，抗生素產(chǎn)生的效力會(huì)明顯下降。最好進(jìn)行細(xì)胞分盤使其密度不超過(guò)25%。

2）每隔2-3天，移除和更換含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基。

3）篩選7天后評(píng)估細(xì)胞形成的病灶。病灶可能需要額外的一周或者更多時(shí)間，這依賴于宿主細(xì)胞系和轉(zhuǎn)染篩選效率。注意：每日進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的觀察。嘌呤霉素的篩選至少需要48h，有效濃度嘌呤霉素的篩選周期一般在3-10天。

4）轉(zhuǎn)移和放置5-10個(gè)抗性克隆到一個(gè)35mm的培養(yǎng)皿中，用選擇培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)7天。此次富集培養(yǎng)是為日后的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備。

注意事項(xiàng)

1）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

2）嘌呤霉素為有毒化合物，操作時(shí)請(qǐng)小心拿放。

  備注：產(chǎn)品信息可能會(huì)有優(yōu)化升級(jí)。請(qǐng)以實(shí)際標(biāo)簽信息為準(zhǔn)。

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標(biāo)題:Palmitoylation alters LDHA activity and pancreatic cancer response to chemotherapy

成員:Luojun Chen, Xiaoke Xing, Yue Zhu, Yali Chen, Huadong Pei, Qibin Song, Juanjuan Li, Pingfeng Zhang

論文因子:9.7 發(fā)表期刊:CANCER LETTERS pmid:38331089

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標(biāo)題:CD97 inhibits osteoclast differentiation via Rap1a/ERK pathway under compression

成員:Wang Wen, Wang Qian, Sun Shiying, Zhang Pengfei, Li Yuyu, Lin Weimin, Li Qiwen, Zhang Xiao, Ma Zhe, Lu Haiyan

論文因子:14.9 發(fā)表期刊:International Journal of Oral Science pmid:38311610

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標(biāo)題:Aggresome formation promotes ASK1/JNK signaling activation and stemness maintenance in ovarian cancer

成員:Chen Yurou, Qiang Yulong, Fan Jiachen, Zheng Qian, Yan Leilei, Fan Guanlan, Song Xiaofei, Zhang Nan, Lv Qiongying, Xiong Jiaqiang, Wang Jingtao, Cao Jing, Liu Yanyan, Xiong Jie, Zhang Wei, Li Feng

論文因子:16.6 發(fā)表期刊:Nature Communications pmid:38351029

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標(biāo)題:Exosome Heterogeneity Affects the Distal “Barrier-Crossing" Trafficking of Exosome Encapsulated Quantum Dots

成員:Di Wu, Hang Sun, Bingwei Yang, Erqun Song, Yang Song, Weihong Tan

論文因子:17.1 發(fā)表期刊:ACS Nano pmid:38394382

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標(biāo)題:Liensinine, a Novel and Food-Derived Compound, Exerts Potent Antihepatoma Efficacy via Inhibiting the Kv10.1 Channel

成員:Biao Ma, Sai Shi, Wei Guo, Hailin Zhang, Zhen Zhao, Hailong An

論文因子:6.1 發(fā)表期刊:JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY pmid:38382537

注意：以上文獻(xiàn) 僅供參考

嘌呤霉素 58-58-2

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