硝酸纖維素膜是蛋白印跡廣泛使用的轉(zhuǎn)移介質(zhì)，其優(yōu)點(diǎn)是對(duì)蛋白有結(jié)合能力強(qiáng)，適用于各種顯色方法，包括同位素，化學(xué)發(fā)光（Luminol類）、常規(guī)顯色、染色和熒光顯色；背景低，信噪比高；使用也很簡便，不需要甲醛預(yù)處理，只須在無離子水面浸潤排出膜內(nèi)氣泡，再在電泳緩沖液中平衡；而且容易封閉，也不需要特別嚴(yán)謹(jǐn)?shù)那逑礂l件。轉(zhuǎn)移到NC膜上的蛋白在合適的條件下可以穩(wěn)定保存很長時(shí)間，但是純的硝纖膜在比較脆，容易卷，不適合用于需要多次重復(fù)清洗的用途。選擇硝纖膜時(shí)要注意的是選擇合適的孔徑，通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔徑的膜，小于20KD的話建議選擇0.2um的，如果小于7KD的話好選擇0.1um的膜。另外由于NC膜上結(jié)合的蛋白會(huì)因?yàn)橐恍┤ノ蹌┒淮?，因此在封閉時(shí)好使用較溫和的Tween20，而且濃度不要超過0.3%（據(jù)說0.05%效果好）。 |
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